Aquaporin 5/AQP5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400567-NIC

AQP5はアクアポリン5をコードしており、上皮細胞および腺細胞の膜を介した浸透圧駆動性の迅速な水輸送を促進する膜型水チャネルである。ヒトでは、AQP5は唾液腺・涙腺ならびに気道および肺胞上皮において、体液分泌と水分（潤い）調節に寄与し、上皮バリアの生理および粘膜表面液の恒常性に影響する。その制御は、チャネルの局在や上皮輸送ダイナミクスに影響するカルシウムおよびcAMP関連経路など、膜トラフィッキングと浸透圧バランスを調節するシグナル伝達過程と交差している。AQP5の発現量や局在の変化は、分泌機能の破綻や上皮の体液バランス異常と関連することが報告されており、気道の炎症性疾患、腺機能障害、腫瘍に伴う細胞遊走や組織水和の変化といった現象に関与し得ると文献上示唆されている。

Aquaporin 5/AQP5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AQP5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AQP5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AQP5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AQP5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。