apolipoprotein E/apoE Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400860-NIC

O APOE humano codifica a apolipoproteína E (apoE), um componente lipoproteico secretado que medeia o transporte de colesterol e triglicerídeos ao se ligar a receptores como LDLR e LRP1 e ao coordenar a depuração e a redistribuição de lipoproteínas. A apoE influencia a homeostase lipídica, a remodelação de membranas e a endocitose mediada por receptores, conectando-se a vias que regulam o efluxo celular de colesterol, o metabolismo de partículas lipoproteicas e a sinalização inflamatória em macrófagos residentes em tecidos e em células da glia. A variação genética e a expressão alterada de APOE estão fortemente associadas à desregulação do manejo de lipídios e a processos neuroinflamatórios relevantes para a neurodegeneração, bem como à biologia relacionada à aterosclerose. Assim, APOE é frequentemente estudado em sistemas que modelam o tráfego de lipídios, a manutenção sináptica e a comunicação cruzada imuno-metabólica.

apolipoprotein E/apoE O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus APOE em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de APOE. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função APOE. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com APOE interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.