ApoER2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403253-ACT

LRP8 codifica il recettore 2 dell’apolipoproteina E (ApoER2), un membro della famiglia dei recettori LDL che media l’endocitosi e la trasduzione del segnale nei neuroni e nelle cellule vascolari. ApoER2 funziona come recettore per Reelin e per le lipoproteine contenenti ApoE, sostenendo la migrazione neuronale, la plasticità sinaptica e il rimodellamento del citoscheletro tramite la segnalazione a valle dipendente da Dab1 e l’interazione con le vie PI3K/AKT e delle chinasi della famiglia Src. Nel sistema nervoso centrale, LRP8 influenza il traffico dei recettori glutammatergici e il potenziamento a lungo termine, collegandone la regolazione ai meccanismi di apprendimento e memoria. Una segnalazione di ApoER2 deregolata e uno squilibrio tra isoforme sono stati associati a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi; LRP8 è inoltre studiato nel metabolismo dei lipidi e nella biologia piastrinica, aspetti rilevanti per la patologia vascolare.

ApoER2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LRP8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ApoER2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LRP8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LRP8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ApoER2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LRP8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ApoER2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ApoER2 nelle cellule tumorali con espressione di LRP8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.