ApoER2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403253-ACT

LRP8は、ニューロンや血管系細胞においてエンドサイトーシスおよびシグナル伝達を担うLDL受容体ファミリーの一員であるアポリポタンパク質E受容体2（ApoER2）をコードします。ApoER2は、ReelinおよびApoE含有リポタンパク質の受容体として機能し、下流のDab1依存性シグナル伝達やPI3K/AKT経路およびSrcファミリーキナーゼ経路とのクロストークを介して、神経細胞の移動、シナプス可塑性、細胞骨格リモデリングを支えます。中枢神経系では、LRP8はグルタミン酸受容体のトラフィッキングや長期増強（LTP）に影響し、その制御は学習・記憶の機構と関連づけられています。ApoER2シグナルの破綻やアイソフォームのバランス異常は、神経発達および神経変性に関わる表現型と関連して報告されており、LRP8は血管病態に関連する脂質取り扱いおよび血小板生物学の観点からも研究されています。

ApoER2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LRP8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ApoER2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LRP8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLRP8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ApoER2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLRP8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるApoER2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLRP8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるApoER2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。