apoD CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402012-ACT

ヒトのAPODはアポリポタンパク質D（apoD）をコードしており、apoDは分泌性のリポカリンとして、アラキドン酸やコレステロール関連脂質を含む疎水性の低分子リガンドに結合して輸送します。apoDは脂質恒常性と細胞ストレス応答に寄与し、神経系および血管系の文脈において、酸化障害や炎症性シグナル伝達を調節する役割が報告されています。その発現は、リポタンパク質代謝、膜リモデリング、細胞外での脂質トラフィッキングなどのプロセスと関連しています。APOD/apoDの制御異常は、文献上、神経変性および神経炎症状態、代謝調節異常、ならびに心血管関連病態と関連づけられており、疾患関連モデルにおける機序的マーカーとしての利用を支持します。

apoD CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性APODの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

apoD CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における APOD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAPOD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性apoDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAPOD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるapoD依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAPOD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるapoD経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。