APOBEC3G CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402769-ACT

ヒトAPOBEC3Gはシチジン脱アミノ化酵素であり、逆転写の過程で一本鎖DNAにC→U編集を導入することでレトロウイルスおよびレトロトランスポゾンを制限し、ウイルスゲノムに致死的な変異誘発（lethal mutagenesis）を促進します。APOBEC3Gは内在性自然免疫の一部として機能し、抗ウイルス防御を形成するインターフェロン刺激遺伝子（ISG）プログラムや核酸センサー経路とも交差します。APOBEC3Gの活性はHIV-1のVifなどのウイルス側拮抗因子によって抑えられるため、その制御は宿主—病原体相互作用やウイルス進化の研究において中心的なテーマとなっています。さらに、APOBECファミリー脱アミノ化酵素活性の制御異常は、ゲノム不安定性や、がん生物学および炎症性状況に関連する変異シグネチャーとも結び付けられています。

APOBEC3G CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性APOBEC3Gの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

APOBEC3G CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における APOBEC3G 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAPOBEC3G転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性APOBEC3Gの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAPOBEC3G遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAPOBEC3G依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAPOBEC3G発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAPOBEC3G経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。