Apelin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401548

Panoramica

APLN codifica l’apelina, un ligando peptidico secreto per il recettore APJ (APLNR) che regola l’omeostasi cardiovascolare, l’angiogenesi, l’equilibrio dei fluidi e la segnalazione metabolica. L’interazione apelina–APJ attiva vie a valle mediate da GPCR, tra cui PI3K/AKT, ERK/MAPK e AMPK, influenzando la migrazione endoteliale, il tono vascolare e l’utilizzo energetico cellulare. Nei tessuti umani, l’espressione di apelina risponde a ipossia e segnali infiammatori ed è spesso studiata nel contesto del rimodellamento vascolare e della biologia del tessuto adiposo. Una deregolazione della segnalazione APLN è stata associata a fenotipi cardiometabolici, disfunzioni vascolari polmonari e sistemiche e a processi del microambiente tumorale come la neovascolarizzazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Apelin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene APLN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del APLN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto APLN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Apelin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di APLN per lo studio della segnalazione di Apelin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni APLN critici per la funzione di Apelin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di APLN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Apelin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Apelin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus APLN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Apelin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Apelin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia APLN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio APLN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.