Ape2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407307-ACT

ヒトAPEX2は、塩基除去修復におけるゲノム完全性の維持や、アバシック（AP）部位をもつDNA損傷の処理に関与する多機能ヌクレアーゼであるアプリン／アピリミジンエンドヌクレアーゼ2（Ape2）をコードする。Ape2は、複製に伴うDNA損傷応答に寄与し、修復因子および複製因子との協調を通じてチェックポイントシグナル伝達を支え、遺伝毒性ストレス下での複製フォークの安定性維持を助ける。APEX2活性の変化は、変異負荷の増大や酸化損傷に対する感受性の上昇と関連づけられており、この経路は、がん生物学やDNA修復不全に起因するその他の疾患に関係する機構と結び付いている。そのため、APEX2はゲノム維持、複製ストレス、DNA損傷因子に対する細胞応答の文脈でしばしば研究されている。

Ape2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性APEX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ape2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における APEX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAPEX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ape2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAPEX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるApe2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAPEX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるApe2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。