AP-2γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400884-ACT

TFAP2C codifica o fator de transcrição humano AP-2γ (TFAP2C), uma proteína de ligação ao DNA específica de sequência que regula programas de expressão gênica que controlam a diferenciação epitelial, a proliferação e o comprometimento de linhagem. O AP-2γ integra sinais em vias do desenvolvimento e responsivas a hormônios e modula redes transcricionais envolvidas na progressão do ciclo celular, na apoptose e na regulação do estado da cromatina. A atividade desregulada de TFAP2C tem sido associada a alterações na identidade epitelial, na invasividade e na reprogramação transcricional em múltiplos contextos de câncer, tornando-o um nó útil para estudar circuitos transcricionais oncogênicos. Além disso, TFAP2C contribui para a biologia placentária e do epitélio mamário, fornecendo uma estrutura para investigar o uso de enhancers específicos de tecido e a cooperatividade entre fatores de transcrição.

AP-2γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TFAP2C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AP-2γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TFAP2C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TFAP2C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AP-2γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TFAP2C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AP-2γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AP-2γ em células tumorais com expressão de TFAP2C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.