AOX1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403997-ACT

ヒトAOX1はアルデヒドオキシダーゼ1をコードしており、モリブデン依存性の細胞質酵素として、異物代謝（第I相）において多様なアルデヒドおよびN-複素環化合物の酸化反応を触媒します。AOX1は、副産物として活性酸素種（ROS）を産生すること、ならびに脂質過酸化で生じる内因性アルデヒドの除去に寄与することを通じて、レドックス恒常性の維持に関与し、より広範な代謝ネットワークとも連関しています。AOX1の発現量や活性の変動は、酸化ストレスに対する細胞の感受性を変化させ、代謝表現型にも影響し得るため、肝機能や解毒能に関する研究において重要です。アルデヒド処理の異常は炎症・線維化過程との関連が示されており、代謝性・酸化的障害モデルにおける修飾因子としてAOX1を検討する根拠となっています。

AOX1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AOX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AOX1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AOX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAOX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AOX1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAOX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAOX1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAOX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAOX1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。