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ANTCRISPR激活质粒(h) | sc-400679-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 SLC25A4 编码腺嘌呤核苷酸转位酶(ANT),这是一种位于线粒体内膜的载体蛋白,负责在线粒体基质与细胞质之间交换 ADP 与 ATP,以支持氧化磷酸化和细胞能量稳态。通过将核苷酸转运与线粒体膜电位相耦联,ANT 有助于协调呼吸链输出、代谢通量,以及与线粒体通透性转换相关的应激反应。ANT 活性失调与线粒体功能障碍表型有关,这些表型会影响高耗能组织,包括神经肌肉与心脏代谢相关情境,因此 SLC25A4 是研究生物能量学与线粒体质量控制的一个重要节点。该基因常用于研究与 ATP/ADP 平衡、凋亡相关的线粒体信号传导,以及对能量应激的适应性反应等通路。
ANT1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC25A4的表达。
ANT1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SLC25A4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SLC25A4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ANT1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SLC25A4位点,并能够研究内源性位点上依赖于ANT1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC25A4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ANT1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。