ANO1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401314-ACT

ANO1（TMEM16Aとしても知られる）は、Ca2+活性化クロライドチャネルをコードしており、上皮の体液分泌、気道および消化管の平滑筋の興奮性、多様な細胞種における膜電位ダイナミクスを調節します。細胞内Ca2+シグナルとの共役を介して、ANO1はイオン輸送、細胞容積の制御、増殖・遊走プログラムと交差するCa2+依存的シグナル伝達ネットワークに影響を及ぼします。ANO1の発現や活性の異常は、上皮分泌表現型の変化や興奮性の制御不全と関連しており、クロライドフラックスが増殖や浸潤性挙動を調節し得ることから、腫瘍生物学の文脈で頻繁に研究されています。その結果、ANO1はCa2+シグナル伝達をクロライド伝導性および疾患関連リモデリングに関わる下流の細胞状態変化へと結び付ける機能的な結節点として位置付けられます。

ANO1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANO1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANO1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANO1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANO1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。