Annexin XI Double Nickaseプラスミド (h): sc-404879-NIC

ANXA11はアネキシンXI（annexin XI）をコードしており、アネキシンXIはCa2+依存的にリン脂質へ結合するタンパク質で、細胞内膜と会合して膜輸送、ベシクル動態、ならびに細胞骨格の組織化に関与します。アネキシンXIは、後期エンドソームの機能やオートファジー関連経路における役割を含むエンドソーム／リソソーム過程と関連づけられており、その膜結合活性はカルシウムシグナルによって調節されます。細胞レベルの研究からは、ANXA11がストレス応答性の集合体形成やRNA顆粒のダイナミクスに関与し、プロテオスタシスおよびオルガネラ恒常性と結びつくことが示唆されています。ANXA11の遺伝学的・機能的攪乱は神経変性疾患および神経筋疾患の生物学と関連しており、タンパク質凝集、軸索維持、細胞ストレス応答の機構研究において重要な標的となります。

Annexin XI ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ANXA11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ANXA11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ANXA11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ANXA11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。