Annexin I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401024-ACT

O ANXA1 humano codifica a anexina I, uma proteína de ligação a fosfolipídios dependente de Ca²⁺ que se associa às membranas celulares para regular o tráfego vesicular, a remodelação do citoesqueleto e o reparo de membrana. A anexina I é um importante mediador da resolução da inflamação e da sinalização imune inata, influenciando a atividade da fosfolipase A2 e a produção de eicosanoides, além de modular a migração de leucócitos e a eferocitose. Ela também está ligada a vias que controlam a proliferação celular, a apoptose e a dinâmica epitélio–mesenquimal, com papéis dependentes do contexto em respostas ao estresse. A expressão desregulada de ANXA1 tem sido relatada em distúrbios inflamatórios e em múltiplos tipos de câncer, nos quais é estudada como reguladora da sinalização do microambiente tumoral e de fenótipos metastáticos.

Annexin I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANXA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Annexin I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANXA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANXA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Annexin I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANXA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Annexin I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Annexin I em células tumorais com expressão de ANXA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.