Annexin I CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401024-ACT

ヒトANXA1は、Ca²⁺依存性のリン脂質結合タンパク質であるアネキシンI（annexin I）をコードしており、細胞膜と会合して小胞輸送、細胞骨格の再構築、膜修復の調節に関与します。アネキシンIは炎症の収束（炎症終結）および自然免疫シグナル伝達の重要なメディエーターで、ホスホリパーゼA2活性やエイコサノイド産生に影響を与えるとともに、白血球の遊走やエフェロサイトーシス（死細胞の貪食）を調節します。さらに、細胞増殖、アポトーシス、上皮—間葉系ダイナミクスを制御する経路とも関連しており、ストレス応答においては状況依存的な役割を担います。ANXA1の発現異常は炎症性疾患および多様ながん種で報告されており、腫瘍微小環境におけるシグナル伝達や転移関連表現型の調節因子として研究されています。

Annexin I CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANXA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Annexin I CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANXA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANXA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Annexin Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANXA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAnnexin I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANXA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAnnexin I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。