ANKTM1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402245-ACT

ヒトTRPA1（ANKTM1とも呼ばれる）は、一過性受容体電位（TRP）チャネルのアンキリン（ankyrin）サブファミリーに属する、カルシウム透過性の非選択的陽イオンチャネルをコードしており、反応性求電子剤、酸化ストレスシグナル、温度関連刺激に対する多モーダルセンサーとして機能します。TRPA1を介したCa²⁺流入は、環境由来および内因性の刺激性物質を、神経の興奮性、神経原性炎症、さらにMAPK、NF-κB、ならびにCa²⁺依存性転写プログラムを介する下流シグナル伝達へと結び付けます。本チャネルは、痛覚、咳および気道反射、炎症応答を形成することから、感覚神経や末梢組織において特に盛んに研究されています。TRPA1活性の調節異常は、慢性疼痛状態、片頭痛、喘息および気道過敏性、炎症性疾患の病態生物学に関連する機序への関与が示唆されており、経路に焦点を当てた機能ゲノミクスでの活用を支持します。

ANKTM1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRPA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANKTM1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRPA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRPA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANKTM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRPA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANKTM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRPA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANKTM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。