Anillin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403342-ACT

ANLN codifica a anilina, uma proteína scaffold conservada que se liga à F-actina e à miosina II e coordena a montagem do anel contrátil, a invaginação do sulco de clivagem e a conclusão da citocinese. A anilina integra sinais das dinâmicas de actomiosina reguladas por RhoA/ROCK com a organização de septinas e a remodelação membrana–citoesqueleto, assegurando a segregação cromossómica correta e a divisão celular. A desregulação da expressão de ANLN está associada a proliferação aberrante, instabilidade genómica e alterações no controlo do ciclo celular, tornando-a um marcador amplamente utilizado em estudos de biologia tumoral e de fidelidade mitótica. Como organizador do citoesqueleto, a anilina também sustenta investigações sobre tensão cortical, arredondamento celular e arquitetura de tecidos epiteliais.

Anillin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANLN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Anillin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANLN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANLN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Anillin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANLN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Anillin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Anillin em células tumorais com expressão de ANLN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.