Angptl4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401369-ACT

ANGPTL4は、栄養状態や酸素供給といったシグナルによって誘導され、脂質の取り扱いと血管生物学を調節する分泌性糖タンパク質アンジオポエチン様4（Angptl4）をコードします。Angptl4はリポタンパクリパーゼを阻害してトリグリセリドに富むリポタンパク質の代謝を制御し、PPARシグナル伝達が司る代謝プログラムとも交差することで、絶食や炎症に対する脂肪組織および肝臓の応答を結び付けます。細胞外環境では、内皮細胞の挙動やバリア機能、細胞外マトリックスのリモデリングに影響し得るため、代謝状態と組織恒常性とをつなぐ役割を担います。ANGPTL4発現の異常は、代謝性疾患、炎症性微小環境、腫瘍関連プロセスとの関連が報告されており、脂質フラックスや血管応答の機序研究における有用な結節点となります。

Angptl4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANGPTL4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Angptl4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANGPTL4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANGPTL4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Angptl4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANGPTL4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAngptl4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANGPTL4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAngptl4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。