Angptl3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402932-ACT

ANGPTL3はアンジオポエチン様タンパク質3（angiopoietin-like 3）をコードしており、主に肝細胞で産生される分泌性糖タンパク質で、全身の脂質およびエネルギー恒常性を制御します。Angptl3はリポタンパクリパーゼおよび内皮リパーゼを阻害し、中性脂肪に富むリポタンパク質の処理やHDLのリモデリングを調節するとともに、脂肪酸フラックスやリポタンパク質クリアランスに影響する代謝シグナル伝達ネットワークと連動します。ANGPTL3活性の変化は脂質異常症の表現型や心代謝リスクと関連しており、肝臓の分泌プログラムや末梢組織における脂質処理を研究する上で重要な結節点となります。また循環因子として、Angptl3は転写制御を脂質代謝経路の測定可能な変化に結び付けるための扱いやすい指標にもなります。

Angptl3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANGPTL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Angptl3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANGPTL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANGPTL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Angptl3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANGPTL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAngptl3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANGPTL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAngptl3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。