Angptl2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406130-ACT

ANGPTL2 kodiert das angiopoietinähnliche Protein 2 (Angptl2), ein sezerniertes Glykoprotein, das Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen in vaskulären und stromalen Kompartimenten moduliert. Angptl2 ist an inflammatorischen Signalwegen und am Gewebeumbau beteiligt und beeinflusst über mit Integrin-Signalen, NF-κB-Aktivierung und Zytokinnetzwerken verknüpfte Pfade das Verhalten von Endothelzellen, die Rekrutierung von Leukozyten sowie die Dynamik der extrazellulären Matrix. Eine dysregulierte ANGPTL2-Expression wurde mit chronischer Entzündung, metabolischen Stressreaktionen, Fibrose und tumorassoziierten Veränderungen des Mikromilieus in Verbindung gebracht und ist daher relevant für die Untersuchung von Mechanismen, die Entzündung mit Angiogenese und Matrixumsatz koppeln. In vitro wird die gezielte Modulation von ANGPTL2 häufig eingesetzt, um parakrine Kommunikation zwischen Immunzellen, Fibroblasten und Endothelzellen zu untersuchen und nachgeschaltete transkriptionelle Programme zu kartieren.

Angptl2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANGPTL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Angptl2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANGPTL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANGPTL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Angptl2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANGPTL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Angptl2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Angptl2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANGPTL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.