Angiotensinogen Double Nickaseプラスミド (h): sc-401013-NIC

ヒトAGTは、レニン–アンジオテンシン系（RAS）を駆動するアンジオテンシンペプチドの前駆体である、肝臓由来タンパク質アンジオテンシノーゲンをコードしている。レニンおよびアンジオテンシン変換酵素（ACE）によるタンパク質分解的プロセシングにより、血管緊張、ナトリウム・水分恒常性、ならびにAT1/AT2受容体経路を介した内分泌シグナル伝達を制御する主要なエフェクターであるアンジオテンシンIIが生成される。下流のシグナル伝達は、カルシウム動員、MAPKカスケード、酸化ストレス応答、そして血管リモデリングや炎症過程を形作る転写プログラムと交差する。AGT/RAS活性の破綻（調節異常）は、高血圧の生物学、心血管・腎の病態生理、代謝ストレス、ならびに多様な組織における線維化関連シグナル伝達において広く研究されている。

Angiotensinogen ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AGT 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AGT内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AGTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AGTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。