Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400229-NIC

AGTR1はアンジオテンシンIIタイプ1受容体（AT1）をコードしており、心血管系および腎組織におけるアンジオテンシンIIの代表的なシグナル伝達の大部分を担う、7回膜貫通型のGPCRです。リガンド結合によりAGTR1は主にGq/11と共役してホスホリパーゼCの活性化、カルシウム動員、PKCシグナルを誘導し、さらにMAPK/ERK、JAK/STAT、NADPHオキシダーゼ依存性ROS、βアレスチン経路も介して、転写プログラム、増殖、炎症、細胞外マトリックスのリモデリングを制御します。GRKおよびβアレスチンを介した受容体の脱感作とトラフィッキングも、シグナルの持続時間やバイアス型シグナルの帰結をさらに規定します。AGTR1シグナルの制御不全は高血圧、心肥大および線維化、血管リモデリング、腎疾患に関与するとされ、レニン-アンジオテンシン系の生物学やストレス応答経路の研究において重要な標的となっています。

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AGTR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AGTR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AGTR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AGTR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。