Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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AMPK alpha 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400104-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- AMPK alpha 1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- AMPK alpha 1ダブルニカースプラスミド（h）およびAMPK alpha 1ダブルニカースプラスミド（h2）は、PRKAA1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: AMPK alpha 1 抗体 (H-4): sc-398861
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
AMPK alpha 1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400104-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AMPK alpha 1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400104-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAA1は、AMP依存性プロテインキナーゼ（AMPK）の触媒サブユニットであるα1をコードしています。AMPKは細胞内のエネルギー状態を感知する中枢的なセンサーで、AMP/ADPの上昇や、LKB1およびCAMKK2（CaMKK2）などの上流キナーゼによって活性化されます。AMPKα1は、グルコース取り込みと解糖系の調節、mTORC1の抑制を介した同化（アナボリック）プログラムの制御、ならびに下流エフェクターのリン酸化を通じたオートファジー促進とミトコンドリア恒常性の維持により、代謝適応を統括します。これらの作用を通して、AMPKシグナルは栄養ストレス、低酸素、酸化ストレスに対する応答を形成し、細胞増殖、脂質代謝、炎症性シグナル伝達に影響を及ぼします。PRKAA1/AMPKα1活性の破綻は代謝疾患の表現型と関連づけられており、代謝リプログラミングが増殖・生存に影響するがん研究の分野でも頻繁に解析対象となっています。
AMPK alpha 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PRKAA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PRKAA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PRKAA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PRKAA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。