Partículas Lentivirales de Activación (m) amphiregulin: sc-419185-LAC

El gen Areg de ratón codifica la anfiregulina, un ligando secretado de la familia del factor de crecimiento epidérmico (EGF) que se une y activa la señalización de EGFR/ErbB para regular la proliferación, la supervivencia y la diferenciación de células epiteliales y estromales. La inducción de anfiregulina se asocia con frecuencia a programas de remodelación tisular, como la reparación de heridas, el mantenimiento de barreras y las respuestas inflamatorias, con activación aguas abajo de las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT. En el microambiente inmunitario, la anfiregulina puede ser producida por subpoblaciones de leucocitos activados y contribuye a la comunicación paracrina entre los compartimentos inmunitario y epitelial. La expresión desregulada de Areg se estudia en contextos como la inflamación crónica, la fibrosis y la biología tumoral, donde la señalización impulsada por EGFR influye en el estado celular y en la dinámica del microambiente.

Las partículas de activación lentiviral amphiregulin (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Areg en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral amphiregulin (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Areg, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de amphiregulin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Areg y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.