amphiregulin CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419185-ACT

マウスAregはアンフィレグリンをコードしており、アンフィレグリンは上皮成長因子（EGF）ファミリーのリガンドで、主にEGFR/ERBB受容体を介してシグナルを伝達し、MAPK/ERK、PI3K–AKT、JAK/STAT経路を活性化します。アンフィレグリンは、上皮の増殖と分化、組織修復、間質–免疫クロストークを制御し、上皮細胞や活性化した骨髄系細胞およびT細胞サブセットなど、複数の細胞種で誘導性に発現します。アンフィレグリン–EGFRシグナルの異常は、炎症の制御不全、線維性リモデリング、腫瘍関連微小環境プログラムと関連づけられており、Aregは経路解析や表現型研究に有用なノードとなります。マウスモデルでは、Aregの発現動態がしばしば解析され、EGFRシグナルの強度をバリア機能、創傷応答、免疫介在性リモデリングと結び付けて理解するために用いられます。

amphiregulin CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Aregの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

amphiregulin CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Areg 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAreg転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性amphiregulinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAreg遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるamphiregulin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAreg発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるamphiregulin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。