Amphiphysin I Double Nickaseプラスミド (h): sc-403904-NIC

ヒトのAMPHは、BARドメインを含むアダプタータンパク質であるアンフィフィジンIをコードしており、膜を形作るとともに、ダイナミン依存的な小胞切断とアクチンのリモデリングを連結することで、クラスリン介在性エンドサイトーシスを協調的に制御します。アンフィフィジンIは、クラスリン、AP-2、およびSH3結合パートナーとの相互作用を介して、シナプス小胞のリサイクリングや受容体の内在化経路に関与し、効率的な神経伝達と膜輸送を支えます。AMPHに関わるエンドサイトーシス機構やシナプス恒常性の破綻は、小胞リサイクリング、タンパク質ターンオーバー、シグナル受容体のトラフィッキングが障害される神経変性疾患やその他の神経疾患の研究において重要です。そのためAMPHは、膜湾曲の感知、エンドソーム輸送、シナプス関連の細胞ストレス応答を解析するための機構的な結節点として広く用いられています。

Amphiphysin I ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AMPH 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AMPH内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AMPHの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AMPHが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。