AMPD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419101

Panoramica

Ampd3 codifica l’AMP deaminasi 3 (AMPD3), un enzima che catalizza la deaminazione dell’AMP in IMP, contribuendo a regolare l’equilibrio dei nucleotidi adenilici e la carica energetica cellulare. Modulando la disponibilità di AMP, AMPD3 influenza il metabolismo dei nucleotidi purinici e collega il rilevamento dello stress energetico all’adattamento metabolico a valle nei tessuti con un ricambio di ATP dinamico. Un’alterazione della deaminazione dell’AMP può modificare i pool IMP/AMP e incidere su vie collegate al recupero dei nucleotidi, alla funzione mitocondriale e all’omeostasi redox. La disregolazione del metabolismo delle purine è rilevante in modelli di stress metabolico e rimodellamento tissutale, rendendo Ampd3 un bersaglio utile per studi meccanicistici nei sistemi murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AMPD3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ampd3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ampd3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ampd3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AMPD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ampd3 per lo studio della segnalazione di AMPD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ampd3 critici per la funzione di AMPD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ampd3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AMPD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AMPD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ampd3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AMPD3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AMPD3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ampd3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ampd3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.