Plásmido Doble Nickase (h) AMID/AIFM2/FSP1: sc-406251-NIC

AIFM2, también conocido como AMID/FSP1, codifica una flavoproteína oxidorreductasa implicada en el control redox celular y en la señalización de respuesta al estrés. FSP1 actúa como una oxidorreductasa dependiente de NAD(P)H que suprime la peroxidación lipídica al regenerar la coenzima Q reducida, lo que la sitúa como un modulador clave de la ferroptosis y del daño oxidativo de membrana. Más allá de su papel antioxidante, AMID/AIFM2 se ha relacionado con procesos asociados a la mitocondria y con vías vinculadas a la apoptosis, con efectos dependientes del contexto sobre la supervivencia celular bajo estrés oxidativo. La actividad desregulada de FSP1 se ha asociado con la biología del cáncer y con la resistencia al daño oxidativo, lo que convierte a AIFM2 en una diana relevante para estudios mecanísticos sobre la regulación de la ferroptosis y la adaptación redox.

AMID/AIFM2/FSP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AIFM2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AIFM2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AIFM2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AIFM2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.