AMBP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403136-ACT

ヒトAMBPは、α1-ミクログロブリン／ビクニン前駆体をコードしており、これは分泌性糖タンパク質で、タンパク質分解（プロテオリティック）処理によりα1-ミクログロブリンとビクニンが生成されます。α1-ミクログロブリンはヘム結合およびレドックス（酸化還元）関連の細胞外防御に関与し、酸化ストレスや炎症性の組織傷害の制御を支えると考えられています。一方、ビクニンはクニッツ型のセリンプロテアーゼ阻害因子として働き、細胞周囲（ペリセルラー）でのタンパク質分解を調節します。これらの作用を通じてAMBPは、細胞外マトリックス（ECM）リモデリング、凝固関連プロテアーゼカスケード、炎症を制御する経路と交差します。AMBPの発現またはプロセシングの異常は、腎臓および肝臓の病態、生体全体の炎症状態、ならびに腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられており、プロテオスタシスや組織傷害応答の機序研究において重要な標的となります。

AMBP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AMBPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AMBP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AMBP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAMBP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AMBPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAMBP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAMBP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAMBP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAMBP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。