ALPPL2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401492-NIC

ALPPL2（alkaline phosphatase, placental-like 2）は、アルカリホスファターゼファミリーに属する、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞外酵素をコードしており、細胞外のリン酸モノエステルを加水分解して局所的なリン酸の利用可能性に影響し得ます。細胞表面タンパク質としてのALPPL2は、細胞周囲（ペリセルラー）におけるヌクレオチド／リン酸代謝、膜マイクロドメインのシグナル伝達、分化に関連するプロセスを調節し得る位置にあります。上皮系の文脈では、系譜マーカーあるいは腫瘍関連マーカーとしてその発現がしばしば検討されており、アルカリホスファターゼ活性や細胞表面抗原提示の変化が、増殖や細胞状態の変化に伴って見られることがあります。これらの特徴により、ALPPL2は細胞アイデンティティ、膜酵素機能、疾患に関連した発現プログラムに関する機構研究において重要です。

ALPPL2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ALPPL2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ALPPL2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ALPPL2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ALPPL2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。