alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400239-NIC

ATP1A1は、Na⁺/K⁺-ATPaseの触媒サブユニットであるα1サブユニットをコードしています。Na⁺/K⁺-ATPaseは必須のP型ATPアーゼで、ATPの加水分解エネルギーを用いて細胞膜を介しNa⁺を細胞外へ排出し、K⁺を細胞内へ取り込みます。イオン勾配を維持することで、ATP1A1は静止膜電位、細胞体積の調節、二次性能動輸送、興奮性を支えるとともに、接着、細胞骨格の構築、ストレス応答に関連するシグナル伝達経路にも影響します。α1型Na⁺/K⁺-ATPase活性は上皮および神経の生理機能の中核を担い、代謝需要やCa²⁺制御を形作るイオン恒常性プログラムにも寄与します。ATP1A1の機能や発現が制御不全になると、疾患に関連する状況で興奮性や輸送の表現型が変化することが報告されており、膜生理とシグナル伝達のクロストークを研究する上で有用なターゲットとなっています。

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATP1A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATP1A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATP1A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATP1A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。