ALKBH8CRISPR激活质粒(m): sc-426676-ACT

小鼠 Alkbh8 编码 ALKBH8，这是一种 tRNA 修饰酶，通过催化摆动位点尿苷（wobble uridine）化学修饰中的关键步骤来维持翻译保真性，其中包括甲基化以及影响密码子解读的氧化性修饰。ALKBH8 通过调控依赖 tRNA 的解码效率，影响蛋白质稳态与细胞应激适应通路，尤其是在氧化应激和基因毒性条件下。ALKBH8 活性改变与 RNA 修饰图谱失衡有关，这种失衡可影响基因组稳定性、应激反应信号以及与肿瘤生物学和炎症性组织损伤模型相关的细胞生存程序。作为表转录组（epitranscriptomic）层面调控翻译的一个关键节点，Alkbh8 常在氧化还原平衡、DNA 损伤应答以及蛋白质稳态相关表型的研究中被重点关注。

ALKBH8 CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Alkbh8的表达。

ALKBH8 CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Alkbh8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Alkbh8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ALKBH8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Alkbh8位点，并能够研究内源性位点上依赖于ALKBH8的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Alkbh8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ALKBH8通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。