Alix Double Nickaseプラスミド (h): sc-400350-NIC

PDCD6IP は、ESCRT に関連するアダプタータンパク質である Alix をコードしており、多小胞体（multivesicular body）の形成、エンドソームにおけるカーゴ選別、エクソソームの産生などを含む膜リモデリング過程を統合的に制御します。Alix は ESCRT-I/III の構成要素や、TSG101、CHMP4 などのパートナーと相互作用し、細胞質分裂の最終切断（abscission）、形質膜修復、受容体のダウンレギュレーションを支えることで、増殖因子シグナルや免疫シグナルの出力とも結び付いています。エンドリソソーム輸送や出芽過程における役割から、Alix はウイルス放出、オートファジー関連の膜動態、神経細胞の恒常性といった文脈でしばしば研究されています。PDCD6IP 依存的な輸送の異常は、がん生物学、神経変性、炎症状態に関連する細胞外小胞シグナル伝達やプロテオスタシス経路の変化と関連付けられています。

Alix ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PDCD6IP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PDCD6IP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PDCD6IPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PDCD6IPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。