Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400809-NIC

ALDH2はミトコンドリア型アルデヒド脱水素酵素2をコードしており、エタノール代謝や脂質過酸化によって生じる反応性アルデヒドをNAD(P)+依存的に酸化するうえで重要な触媒です。アセトアルデヒドや、4-ヒドロキシノネナールなどの毒性をもつ脂質由来アルデヒドを除去することで、ALDH2はミトコンドリアのレドックス恒常性を維持し、酸化ストレスを抑え、アルデヒド付加体の形成からタンパク質や膜を保護します。ALDH2活性は、ミトコンドリアの品質管理、ROSシグナル伝達、ならびにより広範な生体異物代謝および中間代謝経路とも関わっています。ALDH2機能の変化は、アルデヒド誘発性の細胞傷害に対する感受性の違いと関連づけられており、アルコール関連の組織ストレス、心代謝系の表現型、神経変性疾患の機序などの文脈で頻繁に研究されています。

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ALDH2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ALDH2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ALDH2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ALDH2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。