Akt3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400028-ACT

AKT3は、セリン／スレオニンキナーゼであるAkt3をコードしており、PI3K依存性のエフェクターとして成長因子や栄養シグナルを統合し、細胞の生存、代謝、増殖、分化を制御します。Akt3は典型的なPI3K–AKT–mTORシグナル伝達に関与するとともに、FOXO、GSK3、BADを介するネットワークとも交差し、アポトーシス抵抗性、タンパク質合成、細胞周期進行の制御に影響を与えます。ヒト組織では、AKT3活性は特に神経発生や細胞ストレス応答において重要であり、シグナルの破綻は複数の疾患状況における増殖制御の変化や腫瘍関連経路の再編成と関連づけられています。そのため、AKT3発現を操作することは、経路ダイナミクス、フィードバック調節、ならびに増殖・代謝表現型に結び付く細胞状態遷移を解明するうえで有用です。

Akt3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AKT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Akt3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AKT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAKT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Akt3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAKT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAkt3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAKT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAkt3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。