Akt2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419072-NIC

Akt2は、セリン／スレオニンキナーゼであるAKT2をコードしており、PI3Kシグナル伝達の中心的なエフェクターとして、増殖因子およびインスリン受容体からの入力を下流のグルコース取り込み、グリコーゲン合成、脂質代謝、細胞生存の制御へと連結します。マウス組織では、AKT2活性がグルコーストランスポーターの膜輸送、mTORC1により制御される同化（アナボリック）プログラム、ならびにFOXOファミリー転写因子などのアポトーシス促進因子をリン酸化依存的に抑制する機構に影響します。AKT2シグナルの破綻はインスリン感受性や代謝恒常性の変化と関連し、経路の異常活性化は増殖、ストレス応答、がん遺伝子シグナルのモデルにおいてしばしば検討されます。受容体型チロシンキナーゼからのシグナルを代謝および細胞周期の回路と統合する結節点として、Akt2は脂肪細胞、肝細胞、筋細胞、ならびに多様ながん細胞の文脈で広く研究されています。

Akt2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Akt2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Akt2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Akt2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Akt2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。