AKAP 3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408185-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- AKAP 3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- AKAP 3ダブルニカースプラスミド（h）およびAKAP 3ダブルニカースプラスミド（h2）は、AKAP3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
AKAP 3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AKAP 3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-408185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKAP3（A-kinase anchoring protein 3）はヒトの足場（スキャフォールド）タンパク質で、cAMP 依存性プロテインキナーゼA（PKA）および関連するシグナル伝達酵素群を特定の細胞内ドメインに係留し、空間的に制限されたリン酸化反応を支えます。とりわけ精子細胞の生物学における役割でよく知られており、PKAや関連エフェクターのアンカリングは鞭毛機能、運動性、ならびに受精能獲得（カパシテーション）に関連するシグナル伝達に寄与します。局所的なcAMP/PKAシグナル伝達のマイクロドメインを組織化することで、AKAP3はリン酸化依存的な細胞骨格および膜関連プロセスの制御に影響を与えます。AKAPファミリーの足場タンパク質の発現異常や誤局在は、生殖障害をはじめ、区画化されたキナーゼシグナル伝達が重要となるさまざまな状況において、シグナル伝達の破綻と関連づけられています。
AKAP 3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AKAP3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AKAP3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AKAP3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AKAP3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。