AK2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404166-NIC

アデニレートキナーゼ2（AK2）はミトコンドリアの膜間腔に存在するリン酸基転移酵素で、アデニンヌクレオチド間の可逆的なリン酸基転移反応を触媒し、ATP/ADP/AMPの恒常性維持とミトコンドリアにおけるエネルギー交換を支えています。AK2はアデニンヌクレオチドプールを緩衝することで、酸化的リン酸化に連動した代謝、アポトーシスシグナルのダイナミクス、ならびに細胞増殖やストレス応答に影響するヌクレオチド依存性プロセスに寄与します。AK2機能の破綻は、造血系および免疫細胞の発生不全やミトコンドリア機能障害の表現型と関連づけられており、代謝制御、アポトーシス、細胞運命制御の研究において重要です。ヒトの研究系では、AK2はしばしばミトコンドリア生物学、生体エネルギー（バイオエナジェティクス）ストレス、ならびにエネルギーバランスと疾患関連の細胞機能不全を結びつける機構の文脈で解析されています。

AK2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AK2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AK2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AK2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AK2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。