AHRR Double Nickaseプラスミド (h): sc-412812-NIC

ヒトAHRR（aryl-hydrocarbon receptor repressor：芳香族炭化水素受容体リプレッサー）遺伝子は、リガンド誘導性の転写制御因子をコードしており、フィードバック阻害を介してAHRシグナル伝達を減弱させ、異物代謝や細胞ストレス応答を形成します。AHRRはARNTとの競合やコリプレッサー複合体のリクルートにより、CYP1ファミリーの誘導、酸化ストレス、炎症関連遺伝子発現に結びつく転写プログラムを調節します。AHRR活性は上皮分化、免疫調節、環境応答を司る経路とも交差しており、曝露応答性の転写ネットワークが疾患関連表現型にどのように寄与するかを研究する上で重要です。AHRRの制御異常やメチル化状態の変化は、曝露に関連した転写シグネチャーと関連づけられており、がん生物学、肺疾患の機序、免疫調節異常などの文脈で検討されています。

AHRR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AHRR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AHRR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AHRRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AHRRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。