AHNAK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402364-ACT

AHNAK codifica uma proteína gigantesca do tipo “scaffold” que se localiza na membrana plasmática e em compartimentos do citoesqueleto, onde ajuda a organizar complexos multiproteicos envolvidos na arquitetura celular e na transdução de sinais. AHNAK tem sido associada à regulação da dinâmica da actina, ao reparo de membrana e a processos dependentes de cálcio por meio de interações com anexinas, proteínas S100 e componentes de redes juncionais e contráteis. Ao coordenar o remodelamento do citoesqueleto e a comunicação célula–célula/célula–matriz, AHNAK influencia migração, adesão e respostas ao estresse. A expressão desregulada de AHNAK foi relatada em diversos contextos de doença, incluindo a biologia do câncer e o remodelamento tecidual, tornando-a um alvo útil para estudar vias que conectam o arcabouço de membrana a programas transcricionais e fenotípicos.

AHNAK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AHNAK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AHNAK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AHNAK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AHNAK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AHNAK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AHNAK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AHNAK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AHNAK em células tumorais com expressão de AHNAK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.