AHCYL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417109-ACT

O gene humano AHCYL1 codifica a adenosil-homocisteinase-like 1, um parálogo não catalítico da hidrolase de S-adenosil-homocisteína que atua como componente regulador, conectando a capacidade de transmethylation (transmetilação) à sinalização intracelular. O AHCYL1 tem sido implicado na modulação da dinâmica de cálcio dependente do receptor de inositol 1,4,5-trifosfato e de programas associados, como sinalização ligada ao retículo endoplasmático (RE), adaptação metabólica e respostas ao estresse. Por meio dessas conexões, a expressão de AHCYL1 pode influenciar desfechos epigenéticos e transcricionais a jusante de vias responsivas à metilação e ao Ca²⁺. A desregulação do equilíbrio de metilação e da sinalização de Ca²⁺ é frequentemente observada em contextos inflamatórios, neurobiológicos e oncogênicos, tornando o AHCYL1 um nó útil para investigação mecanística em modelos celulares relevantes para doenças.

AHCYL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AHCYL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AHCYL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AHCYL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AHCYL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AHCYL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AHCYL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AHCYL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AHCYL1 em células tumorais com expressão de AHCYL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.