AGR2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403036-ACT

Anterior gradient 2（AGR2）は、ヒト小胞体に局在するプロテインジスルフィドイソメラーゼ（PDI）様因子であり、ERシャペロンネットワークとの相互作用を介して分泌タンパク質のフォールディングとプロテオスタシスを支えます。AGR2は上皮分化やムチン産生、小胞体恒常性の維持の制御にも寄与し、その機能はアンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル伝達や、酸化還元依存的な品質管理プロセスと結び付いています。AGR2の発現異常は、細胞接着や遊走、分泌表現型の変化などを含む上皮性腫瘍の生物学と関連しており、がん関連モデルにおけるストレス適応や分化プログラムを研究するうえで有用な結節点となります。これらの機能により、AGR2はERストレス、タンパク質輸送、上皮系譜状態を扱う研究において、機構的な指標（リードアウト）としても位置付けられます。

AGR2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AGR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AGR2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AGR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAGR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AGR2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAGR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAGR2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAGR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAGR2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。