Agmatinase Double Nickaseプラスミド (h): sc-405176-NIC

AGMATはアグマチナーゼをコードしており、アグマチナーゼはマンガン依存性の金属酵素としてアグマチンを加水分解し、プトレシンと尿素を生成します。これにより、アルギニン由来のアグマチン代謝がポリアミン生合成ネットワークと結び付けられます。アグマチナーゼはプトレシンの利用可能量を調節することで、下流のスペルミジンおよびスペルミンのプールに影響を与え、核酸のパッケージング、翻訳制御、細胞周期の進行を支えます。さらにAGMATの活性は、神経調節作用や代謝シグナルとしての役割をもつ生理活性アミンであるアグマチンを調節することにより、一酸化窒素（NO）関連のアルギニンフラックスや細胞ストレス応答とも交差します。ポリアミン恒常性の破綻やアグマチン／アルギニン代謝の変化は、がん生物学、神経生物学、炎症性表現型との関連が報告されており、AGMATは代謝リプログラミングの機構解明に向けた有用な研究標的となります。

Agmatinase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AGMAT 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AGMAT内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AGMATの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AGMATが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。