The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
AGAT双切口酶质粒(h2): sc-405809-NIC-2
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- AGAT 双切口酶质粒（h2）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- AGAT双切酶质粒（h2）和AGAT双切酶质粒（h22）编码针对GATM的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
AGAT双切口酶质粒(h2) | sc-405809-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类GATM基因编码L-精氨酸：甘氨酸胍基转移酶（AGAT），这是一种线粒体酶，通过将精氨酸和甘氨酸转化为胍基乙酸，催化肌酸生物合成中第一个不可逆的关键步骤，从而借助肌酸—磷酸肌酸系统支持细胞能量缓冲。AGAT活性将氨基酸代谢与线粒体功能及生物能量通路连接起来，影响ATP需求高的组织，并可通过底物可用性与一氧化氮及一碳代谢网络发生交叉。GATM的遗传性破坏与肌酸缺乏及神经代谢表型相关，其表达改变也在肾脏与肌肉生理以及更广泛的代谢应激反应中受到研究。在人类细胞模型中对GATM进行基因编辑可用于开展机制研究，以阐明肌酸通路调控、线粒体代谢以及基因型—表型关系，包括变异体的验证以及用于评估代谢通量与能量稳态的功能性检测方法的开发。
AGAT 双切酶质粒（h2）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 GATM 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对GATM内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏GATM的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了GATM基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。