AGAT Double Nickaseプラスミド (h2): sc-405809-NIC-2
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- AGAT Double Nickaseプラスミド (h2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- AGATダブルニカースプラスミド（h2）およびAGATダブルニカースプラスミド（h22）は、GATMを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
AGAT Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405809-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのGATMはL-アルギニン：グリシンアミジノ基転移酵素（AGAT）をコードしており、AGATはミトコンドリアに局在する酵素として、アルギニンとグリシンをグアニジノ酢酸へ変換することでクレアチン生合成における最初のコミットされた段階を触媒し、クレアチン—ホスホクレアチン系を介した細胞内エネルギー緩衝を支える。AGAT活性はアミノ酸代謝とミトコンドリア機能および生体エネルギー経路を結び付け、高いATP需要をもつ組織に影響を及ぼすとともに、基質の利用可能性を介して一酸化窒素（NO）やワンカーボン代謝ネットワークとも交差する。GATMの遺伝学的な破綻はクレアチン欠乏と神経代謝性の表現型に関連し、発現変動は腎臓および筋の生理、さらにはより広範な代謝ストレス応答において検討されてきた。ヒト細胞モデルでGATMを遺伝子編集することにより、クレアチン経路の制御、ミトコンドリア代謝、ならびに遺伝子型—表現型関係の機序解析が可能となり、変異の妥当性検証や、代謝フラックスおよびエネルギー恒常性を評価する機能アッセイの開発にもつながる。
AGAT ダブルニカースプラスミド（h2）は、human 細胞株における GATM 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GATM内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GATMの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GATMが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。