Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) AFX1: sc-402408-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AFX1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AFX1 (h) y el plásmido de doble nickasa AFX1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FOXO4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AFX1 Anticuerpo (A-7): sc-373877
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AFX1 | sc-402408-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AFX1 | sc-402408-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXO4 (AFX1) es un factor de transcripción de la familia forkhead box O que integra la señalización de insulina/IGF-1, la dinámica de fosforilación PI3K–AKT y vías sensibles al estrés para regular genes que controlan la detención del ciclo celular, la apoptosis, la resistencia al estrés oxidativo y el metabolismo. Su actividad está modulada por modificaciones postraduccionales que influyen en el transporte entre núcleo y citoplasma y en la unión al ADN, configurando así programas transcripcionales vinculados a la homeostasis celular. FOXO4 participa en el diálogo entre redes de señalización MAPK, AMPK y TGF-β y puede influir en la accesibilidad de la cromatina mediante el reclutamiento de cofactores. La desregulación de la señalización de FOXO4 se ha asociado con alteraciones en la proliferación y la adaptación al estrés en la biología del cáncer, así como con la senescencia celular y mecanismos de envejecimiento tisular.
AFX1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOXO4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOXO4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOXO4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOXO4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.