AFX1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402408-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AFX1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AFX1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase AFX1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para FOXO4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AFX1 Anticorpo (A-7): sc-373877
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AFX1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402408-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AFX1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402408-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXO4 (AFX1) é um fator de transcrição da família forkhead box O que integra a sinalização de insulina/IGF-1, a dinâmica de fosforilação PI3K–AKT e vias responsivas ao estresse para regular genes que controlam a parada do ciclo celular, a apoptose, a resistência ao estresse oxidativo e o metabolismo. Sua atividade é modulada por modificações pós-traducionais que influenciam o transporte núcleo–citoplasma e a ligação ao DNA, moldando assim programas transcricionais associados à homeostase celular. O FOXO4 participa de crosstalk em rede com as vias de sinalização MAPK, AMPK e TGF-β e pode influenciar a acessibilidade da cromatina por meio do recrutamento de cofatores. A sinalização desregulada de FOXO4 tem sido associada à proliferação alterada e à adaptação ao estresse na biologia do câncer, bem como à senescência celular e a mecanismos de envelhecimento tecidual.
AFX1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FOXO4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FOXO4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FOXO4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FOXO4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.