ADM Double Nickaseプラスミド (h): sc-402779-NIC

アドレノメデュリン（ADM）は、より大きなプレプロタンパク質からプロセシングされて生じる分泌性ペプチドホルモンであり、血管系および内分泌系の組織に広く発現しています。ADMは、RAMP2またはRAMP3と複合体を形成したカルシトニン受容体様受容体（CALCRL）を介してシグナル伝達を行い、cAMP/PKAおよびその下流のMAPK系・PI3K系経路を活性化することで、血管拡張、内皮バリア機能、血管新生応答、ならびに細胞のストレス適応を制御します。ADMは低酸素や炎症性シグナルによって誘導され、血管リモデリング、体液恒常性、免疫—間質（ストローマ）間コミュニケーションに寄与します。ADMシグナルの破綻は、心代謝機能障害、炎症状態、腫瘍関連血管新生と関連づけられており、微小環境および血管生物学研究における機序解明の要となる分子としての有用性が示唆されています。

ADM ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADM 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADM内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADMの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADMが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。