ADH5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403859-ACT

ヒトADH5は、アルコール脱水素酵素5（S-ニトロソグルタチオン還元酵素［GSNOR］としても知られる）をコードしており、NAD依存性脱水素酵素として、S-ニトロソグルタチオンを代謝することで細胞内のホルムアルデヒド解毒と一酸化窒素（NO）の生理活性を制御します。ADH5は、タンパク質のS-ニトロシル化および酸化還元バランスの調節を通じて、ストレス応答シグナル伝達、ミトコンドリア機能、ならびに炎症やDNA損傷に関連する経路に影響を与えます。ADH5活性の変化は、ニトロソ化ストレスの制御破綻やアルデヒド除去能の低下と関連づけられており、これらの過程は心肺生物学、免疫シグナル、がんに関連する酸化還元適応に関与すると考えられています。そのためADH5は、酸化／ニトロソ化障害、代謝に駆動されるシグナル伝達、アルデヒドストレス下でのゲノム安定性を扱うモデルで頻繁に研究されています。

ADH5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADH5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADH5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADH5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADH5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADH5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADH5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADH5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADH5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADH5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。