ADHβ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402141-ACT

ADH1B は、ヒトのアルコール脱水素酵素 β サブユニット（ADHβ）をコードします。ADHβ は細胞質に存在する亜鉛依存性の酸化還元酵素で、補酵素として NAD+ を用い、エタノールおよびその他の脂肪族アルコールを対応するアルデヒドへ酸化する反応を触媒します。この活性は肝臓におけるアルコール代謝の中核を担い、下流のアルデヒド解毒やレドックス恒常性とも連動して、NADH/NAD+ バランスや酸化ストレス応答に影響を及ぼします。ADH1B の発現量や酵素活性の個体差は、アルコール除去能やアセトアルデヒド負荷の個人差と関連づけられており、アルコール関連の組織傷害や発がんに関わる経路との関連性が示唆されています。さらにエタノール以外にも、ADHβ は内因性および外因性のアルコール基質のより広範な代謝処理に寄与し、代謝適応や細胞ストレスシグナルの研究を支えます。

ADHβ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADH1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADHβ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADH1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADH1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADHβの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADH1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADHβ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADH1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADHβ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。