Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402004-NIC

ヒトのADCY8はアデニル酸シクラーゼ8（AC8）をコードしており、膜結合型でCa2+/カルモジュリンにより刺激される酵素として、ATPをcAMPに変換し、カルシウムシグナルをセカンドメッセンジャー産生へと結び付けます。AC8によって産生されたcAMPはPKA、EPAC、環状ヌクレオチド依存性（CNG）経路を活性化し、CREB依存性転写、シナプス可塑性、興奮性組織における刺激―分泌連関を調節します。GPCRからの入力と細胞内Ca2+ダイナミクスの統合を通じて、ADCY8は神経シグナル伝達、内分泌応答、適応的な細胞恒常性の制御に寄与します。ADCY8の発現やシグナル伝達の異常は、神経精神症状や認知に関わる表現型と関連づけられており、神経疾患および代謝疾患研究で広く観察されるcAMPシグナルの破綻という文脈でも検討されています。

Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADCY8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADCY8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADCY8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADCY8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。