Plasmide Double Nickase (h) Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8: sc-402004-NIC

L’ADCY8 humain code l’adénylate cyclase 8 (AC8), une enzyme membranaire stimulée par le Ca2+/calmoduline, qui convertit l’ATP en AMPc et couple les signaux calciques à la production de seconds messagers. L’AMPc généré par AC8 active la PKA, EPAC et les voies dépendantes des canaux activés par les nucléotides cycliques, modulant ainsi la transcription dépendante de CREB, la plasticité synaptique et le couplage stimulus-sécrétion dans les tissus excitables. En intégrant les signaux issus des GPCR et la dynamique intracellulaire du Ca2+, ADCY8 contribue à la régulation de la signalisation neuronale, des réponses endocriniennes et de l’homéostasie cellulaire adaptative. Des altérations de l’expression ou de la signalisation d’ADCY8 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et cognitifs, et font l’objet d’études dans le cadre des dérégulations de la signalisation de l’AMPc observées en recherche sur les maladies neurologiques et métaboliques.

Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADCY8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADCY8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADCY8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADCY8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.