Adenylate cyclase 10/ADCY10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406235

Panoramica

ADCY10 codifica l’adenilato ciclasi 10 (adenilato ciclasi solubile, sAC), un enzima intracellulare che genera AMP ciclico in risposta a segnali di bicarbonato e calcio, piuttosto che all’attivazione di recettori accoppiati a proteine G. Modellando microdomini di cAMP, ADCY10 modula la segnalazione mediata da PKA ed EPAC, influenzando processi quali la funzione mitocondriale, il trasporto ionico, la capacitazione degli spermatozoi e le risposte di sensing del pH. Il cAMP derivato da sAC integra segnali metabolici e dell’equilibrio acido-base con reti di fosforilazione, con effetti sui programmi trascrizionali e sull’adattamento cellulare allo stress. Un’attività disregolata di ADCY10 è stata studiata in contesti che includono l’infertilità maschile, la gestione del bicarbonato a livello renale e delle vie aeree, e la riprogrammazione della segnalazione del cAMP associata ai tumori, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici di pathway.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 10/ADCY10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADCY10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADCY10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADCY10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Adenylate cyclase 10/ADCY10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADCY10 per lo studio della segnalazione di Adenylate cyclase 10/ADCY10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADCY10 critici per la funzione di Adenylate cyclase 10/ADCY10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADCY10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADCY10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Adenylate cyclase 10/ADCY10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Adenylate cyclase 10/ADCY10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADCY10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADCY10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.