ADAR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401166-ACT

O ADARB1 humano codifica a ADAR2, uma desaminase de adenosina que atua em RNA e catalisa a edição de RNA A-to-I (adenosina para inosina) de forma sítio-seletiva em estruturas de RNA de dupla fita. Essa modificação pós-transcricional pode recodificar códons, alterar sítios de splicing e modular a estabilidade do RNA, moldando assim a excitabilidade neuronal e a sinalização sináptica por meio da edição de transcritos associados à neurotransmissão. A atividade da ADAR2 intersecciona vias inatas de detecção de RNA ao reduzir a imunogenicidade de dsRNA endógeno e ao influenciar programas de genes estimulados por interferon. Padrões desregulados de edição de RNA envolvendo a ADAR2 têm sido associados a fenótipos neurológicos e do neurodesenvolvimento e são estudados como contribuintes moleculares para a remodelação do transcriptoma associada a doenças.

ADAR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADARB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADARB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADARB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADARB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAR2 em células tumorais com expressão de ADARB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.