ADAMTS-8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405463-ACT

ADAMTS8 codifica uma metaloproteinase secretada, dependente de zinco, da família ADAMTS, que remodela a matriz extracelular ao clivar proteoglicanos e substratos relacionados. A atividade de ADAMTS-8 contribui para a regulação da arquitetura tecidual, da migração celular e da sinalização local em microambientes estromais e vasculares, ligando-a a interações entre a MEC e receptores, bem como à renovação da matriz mediada por proteases. Foi relatada expressão desregulada em contextos de inflamação, remodelamento vascular e alterações do microambiente associado a tumores, nos quais a composição alterada da matriz pode influenciar fenótipos angiogênicos e invasivos. Assim, ADAMTS8 é frequentemente estudada como moduladora da proteólise extracelular e da sinalização mediada pela matriz em modelos relevantes para doenças.

ADAMTS-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAMTS8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAMTS-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAMTS8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAMTS8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAMTS-8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAMTS8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAMTS-8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAMTS-8 em células tumorais com expressão de ADAMTS8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.